熒光定量Q-PCR檢測為何會如此受歡迎,要從兩個(gè)問題入手,個(gè)熒光定量Q-PCR是什么?熒光定量Q-PCR檢測作用是什么?弄清楚這兩個(gè)問題,就知道了!
首先我們來分析個(gè)問題——什么是熒光定量Q-PCR?,從概念上講,熒光定量PCR全英文名為Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction,Q-PCR,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對反應(yīng)體系中未知模板進(jìn)行量化分析的方法。
因?yàn)檫@個(gè)方法有三個(gè)優(yōu)勢,分別是屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度高,所以應(yīng)用甚廣,但凡事都是兩面的,在熒光定量PCR應(yīng)用過程中,讓人棘手頭疼的問題便是污染,污染輕則導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,重則癱瘓整個(gè)實(shí)驗(yàn)室,可以說污染得以控制熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)便成功了一半。
常見的污染形式是:熒光定量PCR反應(yīng)體系經(jīng)過不斷升降溫,液體蒸發(fā)又冷凝,PCR管內(nèi)很容易形成攜帶有大量DNA擴(kuò)增片段的氣溶膠,氣溶膠容易泄露擴(kuò)散(如打開擴(kuò)增管蓋、擴(kuò)增管破裂等)而污染實(shí)驗(yàn)室
所以由此可見,熒光定量Q-PCR檢測存在的必要,也就是熒光定量Q-PCR檢測的作用,就是為了試驗(yàn)安全,試驗(yàn)者的人生安全。
熒光定量Q-PCR檢測可以實(shí)現(xiàn)對污染的監(jiān)控,比如可以檢測實(shí)驗(yàn)分區(qū)是否存在氣溶膠污染,監(jiān)控方法為將去離子水放置實(shí)驗(yàn)區(qū)域2-3h后,將該去離子水作為模板擴(kuò)增,去離子水可在實(shí)驗(yàn)室多點(diǎn)放置。
熒光定量Q-PCR檢測是可以知道儀器(如離心機(jī)、移液槍把手等)表面是否被污染,用無菌棉簽蘸取去離子水擦拭儀器及試驗(yàn)臺表面,取少量液體做為模板進(jìn)行擴(kuò)增。
同時(shí)還能檢測移液槍是否被污染,用移液槍反復(fù)吹打無污染的去離子水,將該去離子水作為模板擴(kuò)增。以及試劑是否被污染,將試劑做為陰性模板進(jìn)行擴(kuò)增。
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